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hPSC-多巴胺能神經元分化試劑盒

Nuwacell? hPSC-多巴胺能神經元分化試劑盒是中盛溯源生物科技有限公司原研的一種適用于人類多能干細胞(hPSC)分化為成熟多巴胺能神經元(mDAN, midbrain Dopaminergic)的產品。該試劑盒包含前體細胞分化試劑盒、前體細胞維持培養基和神經元成熟分化培養基,可根據具體需求靈活選擇。應用Nuwacell? 人類多巴胺能神經前體細胞分化試劑盒可以由hPSC獲得高純度的mDAP (>90% Lmx1a+/ Foxa2+/ En1+);多巴胺能神經元成熟分化培養基可以將mDAP分化為成熟的mDAN(TH+/Nurr1+)。分化獲得的人多巴胺能神經前體細胞和人多巴胺能神經元可應用于神經退行性疾病的科學研究,藥物篩選,以及帕金森疾病模型的細胞移植。

*每個試劑盒可分化獲得超過1×107的多巴胺前體細胞(mDAP,DAY11)。

*將基礎培養基和添加物混勻配置成分化培養基,可在2~8中存儲,2周內用完。


1、分化詳細流程圖

Nuwacell? hPSC-多巴胺能神經前體細胞分化試劑盒分化流程圖。

2、分化過程中細胞形態圖示

Nuwacell?? hPSC-多巴胺能神經元分化試劑盒分化過程中細胞形態圖示。

圖示為DAY? 0啟動分化時的hPSC,DAY? 11收獲的mDAP(多巴胺能神經前體細胞),

DAY?12維持培養的mDAP,DAY?45的mDAN(成熟多巴胺能神經元)。標尺:200μm。



3、hPSC來源多巴胺能前體細胞(mDAP)特異性標志物檢測

Nuwacell??hPSC-多巴胺能神經前體細胞分化試劑盒分化的mDAP細胞熒光圖示。

Lmx1a,Foxa2,En1為mDAP的特異性標志物,免疫熒光染色檢測。標尺:200μm。


Nuwacell?? hPSC-多巴胺能神經前體細胞分化試劑盒分化的mDAPs特異性標志物檢測。

圖A為RT-qPCR檢測;圖B為流式細胞法檢測。NKX2.1、DBX1為前腦標志物;Lmx1a、Foxa2、En1、OTX2為中腦標志物,GBX2為后腦標志物。


4、hPSC來源成熟多巴胺能神經元(mDAN)特異性標志物和功能檢測

hPSC來源的成熟中腦多巴胺能神經元(mDAN,DAY 40)細胞熒光圖示。

TH和Nurr1為成熟mDAN的細胞特異性標志物,免疫熒光染色檢測。標尺:200μm。

hPSC來源的成熟中腦多巴胺能神經元(mDAN,DAY 45)多巴胺釋放水平檢測結果。?

對照組為hPSC細胞,正常細胞多巴胺釋放為0-100pg/mL,放射性免疫法檢測。?

hPSC來源的成熟中腦多巴胺能神經元(mDAN,DAY 42)膜片鉗測試結果。

選取符合形態特征的mDA進行膜片鉗測試,可檢測到較穩定的2-10Hz的節律性自發放電;

在電壓鉗模式下,給以超極化電壓可見緩慢增大的內向電流(H電流)。標尺:20μm。

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